更新時(shí)間: | 2022-10-19 |
訪問(wèn)量: | 6149 |
廠商性質(zhì): | 生產(chǎn)廠家 |
RT-PCR技術(shù)服務(wù)1、引物設(shè)計(jì)合成(人、大鼠、小鼠、兔等)2、基因表達(dá)水平檢測(cè)、內(nèi)參檢測(cè)3、SNP檢測(cè)服務(wù)4、甲基化檢測(cè)服務(wù)5、測(cè)序技術(shù)服務(wù)6、芯片檢測(cè)(全基因、MicroRNA)7、染色體分析
反轉(zhuǎn)錄PCR(Reverse transcriptase PCR,RT-PCR)是一種從RNA擴(kuò)增cDNA拷貝的方法。RT-PCR對(duì)于獲得與克隆mRNA的5’、3’末端序列和從非常少量的mRNA樣品構(gòu)建大容量的cDNA文庫(kù)方面都是極為靈敏與通用的方法。此外,RT-PCR還易于鑒定已轉(zhuǎn)錄序列是否發(fā)生突變及呈現(xiàn)多態(tài)性,還可用于測(cè)定基因表達(dá)的強(qiáng)度。我公司采用二步RT-PCR法,可滿足客戶不同的實(shí)驗(yàn)要求。
樣品要求:提供的樣品要新鮮并盡可能多,不推薦提供RNA樣品,或者提供cDNA,并盡可能詳細(xì)的提供背景資料(基因序列、Genebank accession number擴(kuò)增產(chǎn)物的用途等)。
RT-PCR技術(shù)服務(wù)?基本步驟:
● 模板制備:見(jiàn)RNA提取技術(shù)服務(wù)。
● 引物設(shè)計(jì)
客戶提供上、下游引物,或者我公司提供免費(fèi)的引物設(shè)計(jì)及合成(包括RT-PCR半定量檢測(cè)中的內(nèi)參引物)。
● 反轉(zhuǎn)錄
(1)Microtube管中配制下列模板RNA/引物混合液,全量<15 μl。
試劑名稱 | 使用量 |
模板RNA | 2μg |
Oligo(dT)12-18 Primer(50μM) | 2.5μl |
(2)70℃保溫5分鐘后迅速在冰上急冷2分鐘以上。
(3)離心數(shù)秒鐘使模板RNA/引物的變性溶液聚集于Microtube管底部。
(4)在上述Microtube管中配制下列反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液。
試劑名稱 | 使用量 |
上述模板RNA/引物變性溶液 | |
5×M-MLV Buffer | 5μl |
dNTP Mixture(各10 mM) | 1.25μl |
RNase Inhibitor(40 U/μl ) | 25U |
M-MLV(200 U/μl ) | 200U |
RNase free dH2O | up to 25μl |
42℃保溫1小時(shí)。
(5)70℃保溫15分鐘后冰上冷卻,得到cDNA溶液。
若需要表達(dá),參考基因表達(dá)服務(wù)。若需要進(jìn)行RT-PCR半定量分析,接著以下的操作。
● RT-PCR半定量分析
PCR擴(kuò)增目的基因及看家基因,產(chǎn)物經(jīng)過(guò)瓊脂糖凝膠電泳后進(jìn)行灰度掃描分析。
RNA模板的制備需另收費(fèi)(見(jiàn)RNA提取服務(wù))以上為1個(gè)目的基因的報(bào)價(jià)。進(jìn)行相對(duì)定量分析時(shí),同一材料的多個(gè)目的基因的價(jià)格=1個(gè)目的基因價(jià)格×目的基因個(gè)數(shù)。
提供結(jié)果
完整的實(shí)驗(yàn)操作步驟、電泳圖、定量分析結(jié)果等。
RT-PCR技術(shù)服務(wù)參照: